cytometri protokoll

Flowcytometri (FACS) fargeprotokoll (Celleoverflatefarging)

• Høst, vask cellene (enkeltcellsuspensjon) og juster celletallet til en konsentrasjon på 1-5x106 celler / ml i iskald FACS-buffer (PBS, 0,5-1% BSA eller 5-10% FBS, 0,1% NaN3 natriumazid * ). ...
• Tilsett 100 ul cellesuspensjon til hvert rør.

1. Hva brukes flowcytometri til?
2. Hva er prinsippet med flowcytometri?
3. Hva kan flowcytometri måle?
4. Hvordan flekker du celler for flowcytometri?
5. Kan flowcytometri oppdage døde celler?
6. Kan flowcytometri oppdage leukemi?
7. Hvorfor brukes laserlys i flowcytometri?
8. Hvordan brukes flowcytometri i hematologi?
9. Hvordan representerer du flytcytometrodata?
10. Kan flowcytometri oppdage lymfom?
11. Hvor lang tid tar resultatene av flowcytometri?
12. Hvordan kompenserer du strømningscytometri?

Hva brukes flowcytometri til?

Flowcytometri er en laboratoriemetode som brukes til å oppdage, identifisere og telle spesifikke celler. Denne metoden kan også identifisere bestemte komponenter i celler. Denne informasjonen er basert på fysiske egenskaper og / eller markører som kalles antigener på celleoverflaten eller i celler som er unike for den celletypen.

Hva er prinsippet med flowcytometri?

Det grunnleggende prinsippet for flowcytometri er passering av celler i en enkelt fil foran en laser slik at de kan oppdages, telles og sorteres. Cellekomponenter blir fluorescensmerket og deretter begeistret av laseren for å avgi lys ved varierende bølgelengder.

Hva kan måle flowcytometri?

Cytometri, i sin reneste form, er måling av celleegenskaper, som kan omfatte cellestørrelse, celletall, cellesyklus og mer. Denne teknikken lar forskere få svært spesifikk informasjon om individuelle celler.

Hvordan flekker du celler for flowcytometri?

Fortynn passende fluorokrom-merket sekundærreagens i 100 µL Flow Cytometry Farging Buffer og tilsett til cellene. Inkuber i minst 30 minutter ved 2-8 ° C eller på is. Beskytt mot lys. Vask cellene ved å tilsette Flow Cytometry Staining Buffer.

Kan flowcytometri oppdage døde celler?

Tap av membranintegritet er en definitiv indikator for celledød i flowcytometriske analyser. Celler som ekskluderer et dødt cellefargestoff anses å være levedyktige, mens celler med en kompromittert membran tillater fargestoffet inne i cellen å flekke en indre komponent, og dermed identifisere cellen som død.

Kan flowcytometri oppdage leukemi?

Flowcytometri-immunfenotyping kan utføres på blod, beinmarg eller andre prøver for å gi denne tilleggsinformasjonen. Det kan oppdage normale celler så vel som unormale celler hvis mønster av markører vanligvis ses med spesifikke typer leukemi og lymfom.

Hvorfor brukes laserlys i flowcytometri?

Lasere brukes i strømningscytometri som eksitasjonskilde for fluoroformerkede celleprøver. Ofte er det behov for flere laserfarger for å karakterisere flere cellulære egenskaper.

Hvordan brukes flowcytometri i hematologi?

Strømningscytometri har blitt brukt for å nøyaktig identifisere og fenotype mottakerens røde blodlegemer (44). Flowcytometri brukes i økende grad i blodbanken for å vurdere leukocyttforurensning i leukocyttreduserte blodprodukter (45) (46).

Hvordan representerer du flytcytometrodata?

Flowcytometrodata blir typisk representert på en av to måter: histogrammer, som bare måler eller sammenligner en enkelt parameter, og prikkdiagrammer som sammenligner 2 eller 3 parametere samtidig på et to- eller tredimensjonalt spredningsdiagram.

Kan flowcytometri oppdage lymfom?

Flowcytometri kan diagnostisere klassisk Hodgkin-lymfom i lymfeknuter med høy følsomhet og spesifisitet.

Hvor lang tid tar resultatene av flowcytometri?

Disse mønstrene sammenlignes med normale mønstre for å bestemme betydningen av resultatene. Testen tar omtrent tre timer og består i å farge cellene, anskaffe cellene på et flowcytometer og deretter få en dyktig teknolog til å analysere resultatene som er lagret i en datafil.

Hvordan kompenserer du strømningscytometri?

Hvordan kompensere et 4-farges flowcytometrieksperiment riktig

1. 4 trinn for å kompensere et eksperiment med 4 farger. ...
2. Velg riktig transportør for kompensasjon. ...
3. Trinn 2: Samle inn dataene og sørg for at det er tilstrekkelig antall hendelser. ...
4. Beregn kompensasjon riktig. ...
5. Bruk kompensasjonsverdiene og inspiser resultatene.