trypsin edta cellekulturprotokoll

Fremgangsmåte

1. Fjern medium fra kulturbeholderen ved aspirasjon og vask monolaget med en saltoppløsning fri for Ca²⁺ og Mg²⁺ for å fjerne alle spor av serum. ...
2. Dispensere nok trypsin eller trypsin / EDTA-løsning i kulturbeholder (e) for å fullstendig dekke monolaget av celler og plasser i 37 ° C inkubator i ~ 2 minutter.

1. Hvordan forbereder du trypsin EDTA-løsning for cellekultur?
2. Hvorfor trypsin EDTA brukes i cellekultur?
3. Hvordan gjøres underkultur av adherente celler ved bruk av trypsin EDTA og EDTA alene?
4. Hvordan tiner du trypsin EDTA?
5. Kan trypsin drepe celler?
6. Hva kan vi legge til kulturen for å hemme trypsin?
7. Kan EDTA drepe celler?
8. Hvorfor hemmer serum trypsin?
9. Er EDTA giftig for celler?
10. Hvorfor bruker vi trypsin?
11. Hvorfor vasker du celler med PBS?
12. Hvorfor vasker du cellene med PBS før du tilsetter trypsin?

Hvordan forbereder du trypsin EDTA-løsning for cellekultur?

Tilsett 12 til 15 ml ferske cellekulturmedier til en ny kolbe og balanser dette mediet til riktig pH og temperatur. Samle cellesuspensjonen, telle og / eller dele den, og dispensere cellene i den nylig tilberedte kolben. Se produktarket for cellelinjer for anbefalte forhold for subdyrking.

Hvorfor trypsin EDTA brukes i cellekultur?

EDTA fungerer som en metallchelator, som tilsettes trypsinløsninger for å øke aktiviteten. EDTA tilsettes for å fjerne kalsium og magnesium fra celleoverflaten som lar trypsin hydrolysere spesifikke peptidbindinger. Hovedårsaken til å bruke EDTA sammen med trypsin er å fjerne celle til celle vedheft.

Hvordan gjøres underkultur av adherente celler ved hjelp av trypsin EDTA og EDTA alene?

Pipetter trypsin / EDTA på det vaskede celle-monolaget med ca. 1 ml per 25 cm2 overflateareal. Roter kolben for å dekke monolaget med trypsin. Dekanter overflødig trypsin. Sett kolben tilbake i inkubatoren og la stå i 2-10 minutter.

Hvordan tiner du trypsin EDTA?

Fjern trypsin / EDTA-løsningen fra lagring og plasser den over natten ved 2 ° C til 8 ° C. 2. Overfør flasken til et 37 ° C vannbad, og omrør flasken forsiktig for å blande oppløste stoffer. Ikke oppbevar trypsin / EDTA-oppløsning lenger enn nødvendig ved 37 ° C.

Kan trypsin drepe celler?

Inkubering av celler med for høy trypsinkonsentrasjon i for lang tid vil skade cellemembraner og drepe cellene.

Hva kan vi legge til kulturen for å hemme trypsin?

Trypsin hemmes av serum som gir toverdige kationer som kalsium og magnesium, som spiller en rolle i både intra- og intercellulær signalprosess, dvs. dannelse av CAM, så serum tilsettes vanligvis til beholderen når celler har løsnet seg - dette kan bekreftes ved observasjon under en mikroskop.

Kan EDTA drepe celler?

en. Bruk 5 mM EDTA eller høyere MERK: for mye EDTA kan drepe cellene dine b. Accutase og Accumax er celledissosieringsprodukter som selges av Innovative Technologies som kan hjelpe til med å opprettholde enkeltcellsuspensjoner.

Hvorfor hemmer serum trypsin?

Hei, Trypsin er en endopeptidase som fordøyer proteiner. I trypsiniseringsprosessen fordøyes ekstracellulære proteiner, noe som fører til frigjøring av cellene fra bunnen av kulturkaret. ... Serum inneholder mange proteasehemmere, som stopper trypsin, for det meste alfa-1-antitrypsin. Håper dette hjelper!

Er EDTA giftig for celler?

Ingen toksisitet ble observert når celler ble eksponert for 100 mikroM Zn- eller Fe-EDTA, men den samme konsentrasjonen av Cu-EDTA var like giftig som Na-EDTA. Kontinuerlig eksponering av cellekulturene for 5 mikroM Na- eller Zn-EDTA i opptil 7 uker ga ingen indikasjoner på toksisitet.

Hvorfor bruker vi trypsin?

Trypsin er et enzym som hjelper oss med å fordøye protein. I tynntarmen bryter trypsin ned proteiner, og fortsetter fordøyelsesprosessen som begynte i magen. Det kan også bli referert til som et proteolytisk enzym, eller proteinase. Trypsin produseres av bukspyttkjertelen i en inaktiv form kalt trypsinogen.

Hvorfor vasker du celler med PBS?

I cellekultur under spillitting er det nødvendig med PBS-vask for å fjerne serumet til media, slik at trypsin er i stand til å løsne cellene fra plate, noe annet serum kan inaktivere trypsinet.

Hvorfor vasker du cellene med PBS før du tilsetter trypsin?

Før du legger det til cellene, må du vaske cellekulturmediet, siden trypsin også ville bryte ned proteiner som er tilstede i mediet, som FCS, og redusere aktiviteten før den når cellene.